동물조직학 - 영구 조직표본 제작법
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작성일 23-01-23 09:45
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열에 의해 용매는 증발하며, 빈 공간은 파라핀으로 매워진다.
다. 포름알데하이드와 글루타르알데하이드는 조직단백질의 아민기와 反應하여 단백질 분자를 교차연결시켜 고정작용을 강화시킨다. 고정액으로는 주로 포르말린(37% 포름알데하이드의 등장완충액)을 사용한다.
조직이 들어있는 블록은 마이크로톰이라고 하는 기구의 강철칼날 또는 유리칼날에 의해 1~10㎛ 두께의 절편으로 절단된다. 조직 속의 여러 가지 물질들의 성질에 따라 서로 다른 색깔이 입혀질 수 있도록 염색을 한다. 이 과정에서 조직의 구성 성분 각각을 선택적으로 염색해 주는 염료의 혼합액을 사용한다. 고정액은 단백질을 교차연결시키고 조직을 분해하는 효소를 불활성화시켜 세포구조를 보존해준다. 이외의 고정액으로는 부완액, 알코올 등이 있다.
고정액으로는 주로 포르말린(37% 포름알데하이드의 등장완충액)을 사용한다.
e. 100% EtOH ----------- 1min
c. Acetone ------------- 1min
h. washing ------------ 10min
7. 파라핀 제거(Deparaffin)
4. 침투(Infiltration)
d. Acetone ------------- 1min
조직을 오븐에서 꺼내면 조직이 들어있는 파라핀과 함께 굳어진다. 고정액은 단백질을 교차연결시키고 조직을 분해하는 효소를 불활성화시켜 세포구조를 보존해준다. 마이크로톰으로 조직절편을 얇게 자르기 위해서는 고정후 조직을 단단하게 하는 포매물질을 침투시켜 굳혀야 한다.
a. 100% xylene ---------- 3-5min
6. 절편 박절(Cutting)
설명
b. 100% xylene ---------- 3-5min
g. 70% EtOH ------------ 1min
순서
고정이란 세포의 기초물인 단백질, 지질, 탄수화물 등으로 구성된 생체를 고정액에 넣어 그 조직의 구조를 생체와 거의 같게 고정시키는 과정이다.
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f. 90% EtOH ------------ 1min
대부분의 조직은 색이 없기 때문에 표본을 광학현미경으로 observation하기 위해서는 염색을 해야만 한다.
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동물조직학 - 영구 조직표본 제작법
용매가 조직에 침투하여 조직이 투명해 지는 과정이다. 플라스틱포매는 파라핀포매와 달리 고온처리에 의해 조직이 수축되지 않으므로 세포의 변형이 거의 없다.
고정이란 세포의 기초물인 단백질, 지질, 탄수화물 등으로 구성된 생체를 고정액에 넣어 그 조직의 구조를 생체와 거의 같게 고정시키는 과정이다. 조직을 주사위 모양의 정육면체로 가정할 때 한 변의 길이가 5㎜~1㎝를 넘지 않도록 잘라 고정액에 담근다. 자일렌, 톨루엔 이용
투명과정이 끝난 후 용매 속에 있던 조직은 실온에서 수지에 넣거나 오븐(52~60℃) 속의 파라핀 용액에 넣는다.
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3. 투명(Clearing)
8. 염색(Staining)
5. 포매(Embedding)
현미경 observation을 위해서 염색을 하는데 염색약의 대부분은 수용성이므로 파라핀을 제거해야 한다. 포름알데하이드와 글루타르알데하이드는 조직단백질의 아민기와 반응하여 단백질 분자를 교차연결시켜 고정작용을 강화시킨다. 조직의 절단면을 박절하기 위하여 일정한 모양을 만든다. 탈수 후 알코올은 포매물질인 파라핀과 잘 융합되지 않으므로 자일렌(Xylene), 톨루엔(Toluene)과 같은 물질로 대치시켜준다. 이외의 고정액으로는 부완액, 알코올 등이 있다. 포매물질로는 파라핀과 플라스틱 수지가 있는데 파라핀은 광학현미경용 표본제작에 많이 쓰이고 수지는 광학현미경과 전자현미경용 표본제작에 쓰인다. 조직을 주사위 모양의 정육면체로 가정할 때 한 변의 길이가 5㎜~1㎝를 넘지 않도록 잘라 고정액에 담근다.
